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支原體篩檢服務

生物研究支持核心

概覽

細胞培養中的支原體污染會顯著改變細胞行為和遺傳組成，進而影響表現型和基因型實驗結果的可靠性。有鑑於此，生物研究支持中心自2018年起每週為醫學院的研究實驗室提供支原體PCR檢測服務。由於支原體具有高度傳染性和難以根除的特性，強烈建議定期篩檢並妥善處理受污染的培養物，以確保實驗的完整性。.

樣品提交和準備指南

樣品提交和準備指南
研究人員可以按照以下指南所述的各種形式提交樣品。請仔細遵循製備說明，以確保準確且有效率的處理。.

⚠️ 嚴禁：

嚴禁提交含有病原體的樣本、病原體感染的材料或任何被歸類為生物安全等級 3 (BSL-3) 的樣本。.

A. 細胞培養基

A1. 將樣本細胞在不含抗生素的培養基中培養至少3天（最好超過1週）。在採集樣本前3天內不要更換培養基。.

A2. 收集 3毫升 將培養基分裝到兩個 2 mL 微量離心管中（即每管 1.5 mL；用凍存管、15 mL 管或 50 mL 管提交的樣品將 不是 被接受）。.
推薦的微型離心管（Axygen MCT-200-C）可透過生物試劑核心的線上訂購系統購買，用於常規樣品製備。.

A3. 將樣品管儲存在 4oC 直到提交。.

B. 提取的DNA

B1. 取至少100μl萃取的DNA分裝到一個1.5mL的微量離心管中。宿主DNA的濃度無關。.

B2. 將樣品管儲存於-20℃。oC 直到提交。.

C. 表面拭子

C1. 可以使用拭子檢查工作表面（例如培養箱、生物安全櫃）上是否有支原體。.

C2. 將拭子擦拭到目標區域的表面，然後將拭子放回裝有 3mL PBS 的樣品管中。.

C3. 將樣品儲存在 4oC 和 分裝至 2 mL 微量離心管中 提交之前。.

  1. 請在樣品管上清楚標示“您的姓名首字母 – 樣本編號”請在試管上貼上「」。請確保同一樣品的兩個試管都貼有完全相同的樣品名稱標籤。.
    例子：
    如果 陳泰文 提交 3 個樣本, 它們應該被標記為：
    CTM-1, CTM-2, CTM-3 — 每個 複製 （即每個樣品兩個試管），總共 6根管子.
  2. 請依照規定在PPMS系統中提交您的篩檢訂單。 支原體篩檢服務使用者標準操作規程.
  3. 將樣本管放入密封的拉鍊袋中，並附上一張紙條，清楚地寫明：
    1. 使用者名稱
    2. 首席研究員（PI）姓名
    3. 訂單編號
  4. 將密封袋放入位於實驗室大樓 L6-01 的樣本提交冰盒中。.
  5. 請在網站提供的日誌中正確記錄您的提交內容。.

⚠️ 重要的：

樣品提交袋中未附正確標籤的樣品 將不會被處理.

  1. CPOS 工作人員接受您的樣品提交後，將向您在 PPMS 註冊的郵箱發送確認郵件。.

樣品提交時間表

樣品可以提交給 實驗室L6-01附近的冰盒 之間 每週二上午 10:00 和下午 5:00.

⚠️請注意：

在包含以下各項的周內，將不會進行任何測試： 星期二、三或四是公眾假期.

計劃內的測試可能會受到影響 香港天文台發布惡劣天氣警示. 請聯絡 CPOS，電話：3917 9442 或 bioresearch.cpos@hku.hk 獲取最新資訊。.

詳細日程安排可在以下日曆中查看：

支原體篩檢服務安排

檢測參考值： 支原體篩檢參考文獻

支原體去污推薦程序

樣本檢測結果呈支原體陽性

如果確認細胞培養物被支原體污染，強烈建議丟棄或高壓滅菌所有相關的培養物和試劑，以防止進一步傳播。.

隨後，應進行細胞培養設備和表面（包括通風櫃和培養箱）的消毒和滅菌，以消除任何殘留的支原體污染痕跡。.

在受污染的細胞系無法取代的特殊情況下，可以考慮使用抗生素治療來清除支原體。.

  • Plasmocure™（產品目錄編號：ant-pc） 從 InvivoGen 建議如果 普拉斯莫辛® 由於有以下情況，兩週內不足以清除支原體： 普拉斯莫辛®抗藥性支原體。.
    https://www.invivogen.com/plasmocure

⚠️ 重要注意事項：

  • 由於某些支原體菌株可能具有抗生素抗藥性，因此無法保證消毒成功。.
  • 抗生素的細胞毒性作用可能導致培養物流失。.

除非絕對必要，否則應丟棄受感染的培養物。如果必須進行消毒：

  • 經處理的培養物應重新提交進行篩檢：
    • 抗生素治療後立即
    • 在隨後的幾個月中，為了確認持續清除，需要進行後續的清除工作。

預防支原體污染

除了常規的無菌技術外，還可以考慮使用支原體預防劑來預防支原體污染。.

常規支原體檢測對於監測細胞培養物和及時幹預至關重要。如有任何關於支原體篩檢服務的疑問，請與我們聯絡。 bioresearch.cpos@hku.hk 或 3917 7555。.